Plasmide Double Nickase (h) Nek2: sc-417360-NIC

NEK2 code la kinase sérine/thréonine Nek2, un régulateur associé au centrosome de la progression du cycle cellulaire, qui coordonne la séparation des centrosomes, l’assemblage d’un fuseau bipolaire et la ségrégation fidèle des chromosomes. L’activité de Nek2 s’inscrit dans des réseaux de contrôle de la mitose, notamment via la phosphorylation de substrats centrosomaux et des interactions avec les voies de signalisation des checkpoints afin de maintenir la stabilité génomique. Une expression ou une activité dérégulée de NEK2 a été associée à des mitoses aberrantes, à l’aneuploïdie et à une capacité proliférative altérée, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier les mécanismes d’instabilité chromosomique. Dans des modèles de cellules humaines, la perturbation de Nek2 permet d’examiner la dynamique des centrosomes, les défauts du fuseau et les réponses transcriptionnelles en aval pertinentes pour la biologie du cancer et d’autres troubles prolifératifs.

Nek2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEK2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.