Nek2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421853

Übersicht

Nek2 (NIMA-verwandte Kinase 2) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die an den Zentrosomen lokalisiert ist und die Zentrosomentrennung, den Spindelaufbau sowie die korrekte Chromosomensegregation während der Mitose reguliert. In Mauszellen koordiniert die Nek2-Aktivität den Zellzyklusverlauf, indem sie zentrosomale Substrate phosphoryliert und die Mikrotubuli-Dynamik moduliert, was zur Genomstabilität beiträgt. Eine fehlregulierte Nek2-Signalgebung wird mit Zentrosomenamplifikation, Aneuploidie und einer veränderten Kontrolle der Zellproliferation in Verbindung gebracht und ist damit relevant für Studien zur Tumorbiologie und zur Integrität des mitotischen Checkpoints. Nek2 greift zudem in Signalwege ein, die DNA-Schadensantworten und die Dynamik von Zilien steuern, was seine Nutzung als Knotenpunkt zur Analyse zellteilungsgekoppelter Signalnetzwerke unterstützt.

Das Nek2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nek2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nek2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nek2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nek2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nek2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nek2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nek2-Exone abzielen, die für die Nek2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nek2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nek2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Nek2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nek2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nek2 HDR-Plasmid (m) und Nek2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nek2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nek2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.