Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek1 (m): sc-421852
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Nek1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Nek1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nek1 Antibody (E-10): sc-398813
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek1 (m) | sc-421852 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Nek1 (NIMA related kinase 1) est une kinase sérine/thréonine qui coordonne des aspects clés du contrôle du cycle cellulaire, de l’homéostasie des centrosomes et des cils, ainsi que des processus associés aux microtubules. Dans les cellules de souris, Nek1 a été associée à la signalisation et à la réparation des dommages à l’ADN, contribuant à la stabilité du génome via la régulation des voies de contrôle (checkpoints) et de réparation. Ses fonctions s’entrecroisent avec la ciliogenèse et l’organisation du cytosquelette, reliant l’activité de Nek1 à des programmes de développement et de maintien tissulaire. La dérégulation des voies associées à Nek1 a été impliquée dans la pathobiologie liée aux cils et dans des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les réponses au stress et les phénotypes liés à l’architecture cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nek1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nek1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nek1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nek1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nek1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nek1 pour l'étude de la signalisation de Nek1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Nek1 essentiels à la fonction de Nek1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nek1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Nek1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nek1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nek1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Nek1 plasmide HDR (m) et le Nek1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nek1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nek1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.