Plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDL1 (h): sc-406027

Présentation

HECW1 code pour la ligase E3 ubiquitine-protéine humaine NEDL1, une enzyme à domaine HECT qui catalyse le transfert d’ubiquitine vers des protéines substrats afin de réguler leur stabilité et l’intensité des signaux qu’elles véhiculent. NEDL1 participe à des voies de protéostasie dépendantes de l’ubiquitine, qui influencent le renouvellement des protéines, les réponses au stress et les décisions de destinée cellulaire, et a été associée à la modulation de la signalisation apoptotique et à l’homéostasie neuronale. Par une ubiquitination sélective, NEDL1 peut façonner des programmes transcriptionnels en aval ainsi que des réseaux de contrôle qualité, fréquemment perturbés dans la neurodégénérescence et dans des phénotypes cellulaires associés au cancer. Par conséquent, HECW1 suscite un intérêt pour décrypter l’organisation des voies de l’ubiquitine et la régulation spécifique des substrats dans des systèmes cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDL1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HECW1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HECW1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HECW1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NEDL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HECW1 pour l'étude de la signalisation de NEDL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HECW1 essentiels à la fonction de NEDL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HECW1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NEDL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NEDL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HECW1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NEDL1 plasmide HDR (h) et le NEDL1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HECW1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HECW1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.