NDUFS3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427031

Übersicht

Ndufs3 kodiert NDUFS3, eine essenzielle, nukleär kodierte Untereinheit des mitochondrialen Atmungskettenkomplexes I (NADH:Ubiquinon-Oxidoreduktase), die den Elektronentransfer von NADH auf Ubiquinon unterstützt und zum Protonentransport über die innere Mitochondrienmembran beiträgt. Eine korrekte NDUFS3-Funktion ist erforderlich für eine effiziente oxidative Phosphorylierung, die Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotentials und die Regulation des zellulären Redoxgleichgewichts. Störungen von Komplex-I-Komponenten können die ATP-Produktion beeinträchtigen und reaktive Sauerstoffspezies erhöhen, wodurch metabolische Umprogrammierung und Stress-Signalwege beeinflusst werden. In Mausmodellen ist eine Beeinträchtigung von Ndufs3 für die Untersuchung von Mechanismen der mitochondrialen Dysfunktion relevant, die mit neuromuskulären, kardialen und neurodegenerationsassoziierten Phänotypen in Verbindung stehen.

Das NDUFS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ndufs3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ndufs3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ndufs3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NDUFS3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ndufs3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NDUFS3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ndufs3-Exone abzielen, die für die NDUFS3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ndufs3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NDUFS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NDUFS3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ndufs3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NDUFS3 HDR-Plasmid (m) und NDUFS3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ndufs3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ndufs3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.