Plasmide Double Nickase (m) NDUFB5: sc-425783-NIC

Ndufb5 code pour NDUFB5, une sous-unité accessoire du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale (NADH:ubiquinone oxydoréductase) qui favorise un transfert efficace des électrons du NADH vers l’ubiquinone et contribue à la phosphorylation oxydative. Un assemblage et une stabilité corrects du complexe I aident à maintenir le potentiel de membrane mitochondrial, la production d’ATP et l’homéostasie rédox, reliant ainsi la fonction de NDUFB5 au métabolisme énergétique cellulaire et au contrôle des espèces réactives de l’oxygène. Dans les modèles murins, la perturbation des composants du complexe I est couramment utilisée pour étudier le dysfonctionnement mitochondrial dans les réponses au stress bioénergétique, l’adaptation métabolique et les voies de mort cellulaire. En tant que facteur du complexe I codé par le noyau, NDUFB5 est pertinent pour la recherche sur les mécanismes des maladies mitochondriales et sur des phénotypes plus larges associés à une phosphorylation oxydative altérée.

NDUFB5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ndufb5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ndufb5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ndufb5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ndufb5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.