Plasmide Double Nickase (h) NDH II: sc-402757-NIC

DHX9 code NDH II, une hélicase multifonctionnelle ATP-dépendante de la famille DExH-box qui se lie à l’ADN et à l’ARN afin de remodeler les structures des acides nucléiques lors de la transcription, de la maturation des ARN et de la maintenance du génome. NDH II participe à la surveillance et à la résolution des R-loops, soutient la progression des fourches de réplication et s’interface avec les voies de réponse aux dommages de l’ADN, notamment des mécanismes couplés à la recombinaison homologue et à la signalisation des points de contrôle. Par ses rôles dans la coordination de la transcription avec le métabolisme des ARN et dans la préservation de la stabilité du génome, DHX9 est fréquemment étudié dans le cadre des réponses au stress et du dérèglement de l’homéostasie des hybrides ARN–ADN. Une activité altérée de DHX9 a été associée à des programmes d’épissage aberrants et à des phénotypes d’instabilité chromosomique pertinents pour la recherche mécanistique en biologie du cancer et pour le stress génomique lié aux processus de neurodégénérescence.

NDH II Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DHX9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DHX9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DHX9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DHX9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.