NCOAT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429251

Panoramica

Mgea5 codifica per NCOAT (nota anche come O‑GlcNAcase), un enzima chiave che rimuove l’β‑N‑acetilglucosamina O‑legata (O‑GlcNAc) dai residui di serina e treonina delle proteine nucleari e citoplasmatiche. Insieme alla O‑GlcNAc transferasi, NCOAT regola il ciclo dinamico dell’O‑GlcNAc, che integra il rilevamento dei nutrienti con la segnalazione dipendente dalla fosforilazione, influenzando trascrizione, progressione del ciclo cellulare, proteostasi e risposte allo stress. L’attività di NCOAT incide su vie quali la segnalazione insulina/AKT, la regolazione della cromatina e il controllo qualità delle proteine, modulando i livelli di O‑GlcNAc su fattori di trascrizione, chinasi e proteine del citoscheletro. Un’omeostasi dell’O‑GlcNAc deregolata è stata associata a fenotipi legati a metabolismo e neurodegenerazione, rendendo Mgea5 un bersaglio utile nei modelli murini di segnalazione e regolazione epigenetica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NCOAT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mgea5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mgea5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mgea5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NCOAT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mgea5 per lo studio della segnalazione di NCOAT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mgea5 critici per la funzione di NCOAT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mgea5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NCOAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NCOAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mgea5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NCOAT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NCOAT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mgea5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mgea5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.