NCOAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429251

Übersicht

Mgea5 kodiert NCOAT (auch als O‑GlcNAcase bekannt), ein Schlüsselenzym, das O‑verknüpfte β‑N‑Acetylglucosamin‑Reste (O‑GlcNAc) von Serin- und Threoninresten nukleärer und zytoplasmatischer Proteine entfernt. Zusammen mit der O‑GlcNAc‑Transferase reguliert NCOAT den dynamischen O‑GlcNAc‑Zyklus, der Nährstoffsensorik mit phosphorylierungsabhängiger Signalübertragung verknüpft und dadurch Transkription, Zellzyklusprogression, Proteostase und Stressantworten beeinflusst. Die NCOAT‑Aktivität wirkt sich auf Signalwege wie die Insulin/AKT‑Signalgebung, die Chromatinregulation und die Proteinkontrolle aus, indem sie die O‑GlcNAc‑Niveaus auf Transkriptionsfaktoren, Kinasen und Zytoskelettproteinen moduliert. Eine gestörte O‑GlcNAc‑Homöostase wurde mit metabolischen sowie neurodegenerationsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Mgea5 ein nützliches Ziel in Mausmodellen zur Untersuchung von Signalwegen und epigenetischer Regulation darstellt.

Das NCOAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mgea5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mgea5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mgea5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NCOAT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mgea5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NCOAT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mgea5-Exone abzielen, die für die NCOAT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mgea5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NCOAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NCOAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mgea5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NCOAT HDR-Plasmid (m) und NCOAT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mgea5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mgea5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.