Plasmide CRISPR/Cas9 KO NAT-3 (m): sc-421825

Présentation

Le gène murin **Nat3** code **NAT-3**, un membre de la famille des **N-acétyltransférases des arylamines**, qui catalyse des réactions de **N-acétylation dépendantes de l’acétyl-CoA** impliquées dans la biotransformation des xénobiotiques. NAT-3 contribue à la capacité de détoxification cellulaire en modulant la réactivité chimique et l’élimination des amines aromatiques et de composés apparentés, en interaction avec des processus métaboliques hépatiques et extra-hépatiques. Les variations d’activité des enzymes NAT sont largement pertinentes pour la susceptibilité aux substances chimiques et les réponses tissulaires induites par des toxiques, ce qui soutient l’utilisation de modèles **Nat3** dans des études sur le stress et l’inflammation associés au métabolisme. Chez la souris, une perte de fonction de **Nat3** peut aider à clarifier comment un métabolisme dépendant de l’acétylation influence l’homéostasie cellulaire en aval dans des conditions d’exposition définies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NAT-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nat3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nat3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nat3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NAT-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nat3 pour l'étude de la signalisation de NAT-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nat3 essentiels à la fonction de NAT-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nat3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NAT-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NAT-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nat3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NAT-3 plasmide HDR (m) et le NAT-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nat3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nat3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.