Na+ CP type VIIIα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422823
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Na+ CP type VIIIα El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Na+ CP type VIIIα, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Na+ CP type VIIIα Anticuerpo (W-78): sc-81884
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Na+ CP type VIIIα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422823 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Scn8a codifica el canal de sodio dependiente de voltaje murino Na⁺ CP tipo VIIIα, un determinante clave del inicio del potencial de acción y del disparo de alta frecuencia en las neuronas. Al mediar una rápida entrada de Na⁺ en el segmento inicial del axón y en los nodos de Ranvier, sostiene la excitabilidad neuronal y la propagación de la señal, y se acopla funcionalmente a vías de repolarización de la membrana y de homeostasis iónica. La alteración de la actividad de SCN8A se utiliza ampliamente para modelar mecanismos de hiperexcitabilidad relacionados con canalopatías, incluida la susceptibilidad a convulsiones, anomalías del procesamiento sensorial y fenotipos del neurodesarrollo. Por ello, esta diana es relevante para estudiar cómo el compuerto y la distribución de los canales de sodio moldean la fisiología a nivel de circuitos y los programas transcripcionales downstream.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type VIIIα (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scn8a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scn8a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scn8a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Na+ CP type VIIIα.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scn8a para la investigación de la señalización de Na+ CP type VIIIα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Scn8a críticos para la función de Na+ CP type VIIIα
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scn8a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Na+ CP type VIIIα CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Na+ CP type VIIIα CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scn8a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Na+ CP type VIIIα (m) y el plásmido HDR Na+ CP type VIIIα (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scn8a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scn8a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.