NAPRT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406144

Descripción general

NAPRT (fosforribosiltransferasa de nicotinato) es una enzima clave en la biosíntesis de NAD que cataliza la conversión del ácido nicotínico en mononucleótido de ácido nicotínico, apoyando la vía de Preiss–Handler. Al mantener los reservorios celulares de NAD, NAPRT influye en la homeostasis redox y en la actividad de enzimas dependientes de NAD implicadas en el metabolismo, las respuestas al estrés y la reparación del ADN. La alteración de la expresión o actividad de NAPRT se ha asociado con la reprogramación metabólica y con dependencias de rescate de NAD observadas en múltiples contextos de enfermedad, incluido el cáncer y las afecciones inflamatorias. Como resultado, NAPRT se estudia con frecuencia en vías que regulan el metabolismo energético, la función mitocondrial y la resiliencia celular frente al estrés genotóxico u oxidativo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NAPRT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NAPRT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NAPRT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NAPRT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NAPRT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NAPRT para la investigación de la señalización de NAPRT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NAPRT críticos para la función de NAPRT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NAPRT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NAPRT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NAPRT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NAPRT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NAPRT (h) y el plásmido HDR NAPRT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NAPRT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NAPRT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.