Nap-22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406361

Übersicht

BASP1 (Nap-22) ist ein membranassoziiertes, myristoyliertes Protein, das in Neuronen und anderen erregbaren Zellen angereichert ist und dort zur Organisation des kortikalen Aktins, zur Membrandynamik sowie zur phosphoinositidabhängigen Signalübertragung beiträgt. Es moduliert Transkriptionsprogramme durch Interaktionen mit nukleären Faktoren wie WT1 und ist an Prozessen wie Neuritenauswachsung, synaptischer Funktion und Zelldifferenzierung beteiligt. Die BASP1-Aktivität wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die die Umgestaltung des Zytoskeletts, die Signaltransduktion an der Plasmamembran und die epigenetische Kontrolle der Genexpression steuern. Veränderte BASP1-Expression oder -Regulation wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter neuroentwicklungsbezogene Phänotypen sowie krebsassoziierte Veränderungen von Proliferations- und Invasionsprogrammen.

Das Nap-22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BASP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BASP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BASP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nap-22-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BASP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nap-22-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BASP1-Exone abzielen, die für die Nap-22-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BASP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nap-22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Nap-22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BASP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nap-22 HDR-Plasmid (h) und Nap-22 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BASP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BASP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.