Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nanos2: sc-404123-ACT

Le gène humain **NANOS2** code la protéine Nanos2, une protéine conservée se liant à l’ARN, surtout connue pour réguler le destin des cellules germinales en contrôlant des programmes d’expression génique post‑transcriptionnels. Nanos2 participe à des réseaux de stabilité des ARNm et de répression de la traduction qui contribuent à maintenir l’identité germinale et à empêcher une différenciation inappropriée, en s’intégrant à des voies qui régissent la progression du cycle cellulaire, l’entrée en méiose et la synchronisation du développement. Une activité altérée de la famille **NANOS** a été associée à des défauts du développement des cellules germinales et à une biologie de la reproduction dérégulée, et l’expression de **NANOS2** est fréquemment étudiée comme marqueur de spécification de lignée dans des modèles de développement et de cellules souches. Ces caractéristiques font de **NANOS2** un nœud utile pour étudier les régulons d’ARN, les réseaux géniques du développement et les états transcriptionnels dépendants du contexte.

Nanos2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NANOS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nanos2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NANOS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NANOS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nanos2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NANOS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nanos2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nanos2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NANOS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.