Plasmide CRISPR d'Activation (h) NaDC-1: sc-407586-ACT

SLC13A2 code le cotransporteur de dicarboxylates dépendant du sodium NaDC-1 (SLC13A2), un transporteur de la membrane plasmique qui couple les gradients de Na⁺ à l’absorption du citrate, du succinate et d’autres intermédiaires du cycle de Krebs. Dans les épithéliums polarisés, NaDC-1 contribue à la réabsorption de substrats métaboliques et à la disponibilité intracellulaire du citrate, reliant le transport membranaire au métabolisme mitochondrial, à l’équilibre rédox et aux voies biosynthétiques. En modulant les réserves cytosoliques de citrate, SLC13A2 peut influencer la production d’acétyl-CoA ainsi que la synthèse lipidique en aval et les processus d’acétylation épigénétique. Des altérations de l’activité de NaDC-1 et de la prise en charge des dicarboxylates ont été étudiées dans des contextes pertinents pour la physiologie du transport tubulaire rénal, la dérégulation métabolique et les troubles de l’homéostasie des anions organiques.

NaDC-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC13A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NaDC-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC13A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC13A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NaDC-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC13A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NaDC-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NaDC-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC13A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.