Plasmide CRISPR d'Activation (h) NAB2: sc-402117-ACT

NAB2 (NGFI-A binding protein 2) est un corégulateur transcriptionnel nucléaire qui module les réponses des gènes précoces immédiats en interagissant avec les facteurs de transcription de la famille EGR, façonnant des programmes dépendants du stimulus qui contrôlent la différenciation, la prolifération et l’adaptation cellulaire au stress. En influençant les sorties transcriptionnelles en aval des voies de signalisation liées à MAPK/ERK et d’autres voies régulées par l’activité, NAB2 contribue à ajuster des réseaux de gènes impliqués dans le contrôle de la croissance et la spécification des lignages. Une régulation altérée de NAB2 est pertinente pour les états transcriptionnels aberrants observés en cancérologie et dans d’autres troubles prolifératifs, et des fusions du gène NAB2 ainsi qu’une expression dérégulée ont été associées à des processus tumorigènes dans certains contextes. Ces propriétés font de NAB2 une cible utile pour disséquer la dynamique facteur de transcription–corégulateur et cartographier les circuits d’expression génique sensibles aux stimuli dans les cellules humaines.

NAB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NAB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NAB2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NAB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NAB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NAB2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NAB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NAB2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NAB2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NAB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.