Plasmide CRISPR/Cas9 KO N4BP1 (h): sc-406515

Présentation

N4BP1 (NEDD4 binding protein 1) est une protéine associée à l’ubiquitine et liée aux endosomes, impliquée dans la régulation de la signalisation dépendante de l’ubiquitine et des voies de trafic des protéines. Il a été rapporté qu’elle agit comme un régulateur négatif de la signalisation de l’immunité innée, en influençant les réponses en aval des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) et en modulant les programmes transcriptionnels associés à NF-κB. Grâce à ses interactions avec des composants de la voie de l’ubiquitine et des complexes associés aux membranes, N4BP1 peut affecter l’homéostasie immunitaire, la signalisation inflammatoire et les réponses au stress cellulaire. Des altérations de l’activité de N4BP1 ont été étudiées dans le contexte de la dérégulation immunitaire et des mécanismes de maladies liées à l’inflammation, ce qui étaye sa pertinence pour une génomique fonctionnelle axée sur les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO N4BP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène N4BP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du N4BP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert N4BP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine N4BP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en N4BP1 pour l'étude de la signalisation de N4BP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de N4BP1 essentiels à la fonction de N4BP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de N4BP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le N4BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le N4BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus N4BP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le N4BP1 plasmide HDR (h) et le N4BP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie N4BP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles N4BP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.