Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYT1L: sc-407946-ACT

MYT1L code un facteur de transcription neuronal à doigts de zinc qui soutient les programmes de spécification de lignée et de maturation dans le système nerveux en développement et postnatal. MYT1L module la chromatine et des réseaux transcriptionnels qui contribuent à maintenir l’identité neuronale tout en réprimant l’expression de gènes non neuronaux, influençant des voies liées à la neurogenèse, à la fonction synaptique et à la régulation génique dépendante de l’activité. Des variations génétiques et une expression dérégulée de MYT1L ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux, notamment les troubles du spectre de l’autisme, la déficience intellectuelle et des traits comportementaux apparentés. En tant que régulateur de l’état transcriptionnel neuronal, MYT1L est largement étudié dans des modèles de différenciation neuronale, de reprogrammation et de développement des circuits neuronaux.

MYT1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYT1L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYT1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYT1L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYT1L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYT1L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYT1L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYT1L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYT1L dans les cellules tumorales présentant une expression de MYT1L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.