Plásmido CRISPR de Activación (h) Myosin XVIIIA: sc-403216-ACT

El MYO18A humano codifica la miosina XVIIIA, un motor no convencional asociado a la actina implicado en la organización del citoesqueleto cortical, la regulación de la forma celular y la coordinación del transporte intracelular y de la dinámica relacionada con la adhesión. Mediante interacciones con la F-actina y complejos de andamiaje, MYO18A contribuye a procesos como el tráfico vesicular, la organización del aparato de Golgi y la remodelación asociada a la migración, que se entrecruzan con la señalización de las GTPasas Rho y las vías de mecanotransducción. La alteración de la expresión de MYO18A y la desregulación del citoesqueleto se han estudiado en el contexto del comportamiento celular invasivo y de señales proliferativas aberrantes, lo que respalda su relevancia en fenotipos asociados a enfermedad. Estas características hacen de MYO18A un nodo útil para estudiar cómo los motores basados en actina acoplan el tráfico de membranas con la arquitectura del citoesqueleto en células humanas.

Myosin XVIIIa El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYO18A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Myosin XVIIIa El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYO18A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYO18A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Myosin XVIIIa. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYO18A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Myosin XVIIIa en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Myosin XVIIIa en células tumorales con expresión de MYO18A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.