Plasmide Double Nickase (h) Myosin X: sc-402204-NIC

MYO10 code la myosine X, un moteur non conventionnel basé sur l’actine, enrichi à l’extrémité des filopodes, où il soutient l’initiation et l’allongement des filopodes, le transport de cargos et la dynamique du bord cellulaire. La myosine X interagit avec les réseaux de régulation de l’actine et la machinerie d’adhérence, contribuant à des processus tels que le trafic des intégrines, la protrusion membranaire et la migration cellulaire directionnelle. Par ces fonctions, elle influence le remodelage du cytosquelette, les interactions cellule–matrice et les voies de transport intracellulaire importantes pour la morphogenèse et la motilité. Une activité dérégulée de MYO10 et un comportement filopodial altéré ont été associés dans la littérature à des phénotypes cellulaires invasifs ainsi qu’à des modifications des programmes de signalisation et d’adhérence étudiés dans des contextes d’oncologie et de neurobiologie.

Myosin X Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MYO10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MYO10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MYO10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MYO10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.