Plásmido CRISPR de Activación (h) Myosin X: sc-402204-ACT

El gen humano **MYO10** codifica la miosina X, un motor no convencional basado en actina, enriquecido en las puntas de los filopodios, que favorece el inicio y la elongación de los filopodios, el transporte de carga y la remodelación polarizada de la membrana. La miosina X coordina el tráfico de integrinas y la maduración de las adhesiones, conectando la dinámica de la actina con la migración celular, el crecimiento de neuritas y los procesos de guía. Mediante interacciones con la señalización por fosfoinosítidos y reguladores del citoesqueleto, **MYO10** contribuye a vías que controlan la motilidad protrusiva y la detección de la matriz extracelular. La alteración de la expresión o la actividad de **MYO10** se ha asociado con fenotipos celulares invasivos y con una morfogénesis desregulada, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar mecanismos dependientes del citoesqueleto relevantes para la biología del cáncer y la investigación del neurodesarrollo.

Myosin X El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYO10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Myosin X El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYO10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYO10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Myosin X. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYO10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Myosin X en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Myosin X en células tumorales con expresión de MYO10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.