Myosin VI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401815

Übersicht

MYO6 kodiert das menschliche Myosin VI, einen unkonventionellen, aktinbasierten Motor, der sich einzigartigerweise in Richtung des Minus-Endes von Aktinfilamenten bewegt und so den intrazellulären Transport sowie die Membrandynamik unterstützt. Myosin VI ist an der clathrinvermittelten Endozytose, der endosomalen Sortierung, dem Transport im Golgi- und sekretorischen Weg sowie an der Organisation aktinreicher Strukturen wie Mikrovilli und Stereozilien beteiligt. Durch Interaktionen mit Adapterproteinen und Fracht trägt es zu Zellmigration, Adhäsion und mechanosensorischen Prozessen bei und verknüpft dabei den Umbau des Zytoskeletts mit dem Vesikeltransport. Eine Fehlregulation von MYO6 wurde mit hörbezogenen Phänotypen und einer veränderten epithelialen Organisation in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Sensorik sowie zu zytoskelettgetriebenen Transportdefekten relevant macht.

Das Myosin VI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYO6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYO6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYO6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myosin VI-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYO6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myosin VI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYO6-Exone abzielen, die für die Myosin VI-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYO6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myosin VI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Myosin VI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYO6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myosin VI HDR-Plasmid (h) und Myosin VI HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYO6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYO6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.