Myosin Va Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402108

Descripción general

MYO5A codifica la miosina Va, una proteína motora basada en actina que impulsa el transporte a larga distancia de orgánulos unidos a membrana y complejos proteicos a lo largo de la red cortical de actina. La miosina Va coopera con GTPasas Rab y proteínas adaptadoras para regular el tráfico vesicular, el reciclaje endocítico, la dinámica de los gránulos secretores y la entrega polarizada de cargas en neuronas, melanocitos y células inmunitarias. Estos procesos contribuyen a la función sináptica, la distribución de melanosomas y la polarización celular, vinculando la actividad de MYO5A con fenotipos neurológicos y de pigmentación cuando se altera. En modelos celulares humanos, las alteraciones del transporte dependiente de miosina Va pueden influir en la señalización compartimentalizada y en la organización del citoesqueleto, aspectos relevantes para la disfunción celular asociada a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myosin Va (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MYO5A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MYO5A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MYO5A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myosin Va.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MYO5A para la investigación de la señalización de Myosin Va, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MYO5A críticos para la función de Myosin Va
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MYO5A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Myosin Va CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Myosin Va CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MYO5A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myosin Va (h) y el plásmido HDR Myosin Va (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MYO5A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MYO5A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.