Plásmido CRISPR de Activación (h) MyoD: sc-400092-ACT

MYOD1 codifica el factor de transcripción humano MyoD de tipo hélice‑bucle‑hélice básico, que actúa como regulador maestro de la miogénesis esquelética. MyoD se une a motivos E‑box y coopera con miembros de la familia MEF2 y con remodeladores de la cromatina para activar programas de linaje muscular, coordinar la salida del ciclo celular y promover la diferenciación mediante el control transcripcional de genes miogénicos estructurales y metabólicos. Su actividad se integra con señales de vías como Wnt/β‑catenina, Notch, TGF‑β/SMAD y MAPK, que modulan el compromiso y la maduración de los mioblastos. La expresión o función desregulada de MYOD1 se utiliza como marcador de un estado miogénico alterado y se ha estudiado en contextos como la regeneración deficiente, la biología de la atrofia muscular y los programas transcripcionales asociados a MYOD1 en modelos de rabdomiosarcoma.

MyoD El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYOD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MyoD El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYOD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYOD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MyoD. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYOD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MyoD en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MyoD en células tumorales con expresión de MYOD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.