Plásmido CRISPR de Activación (m) Myocardin: sc-431931-ACT

Myocd codifica la miocardina, un potente coactivador transcripcional que se asocia con el factor de respuesta al suero (SRF) para regular programas génicos dependientes de la caja CArG que controlan la diferenciación del músculo liso y cardíaco. La miocardina integra señales procedentes de la dinámica RhoA/actina y de vías asociadas a MAPK para coordinar el ensamblaje del aparato contráctil, la organización del citoesqueleto y el cambio fenotípico de las células del músculo liso vascular. La alteración de la actividad de MYOCD se vincula con una remodelación vascular desregulada y con cambios en la expresión de genes del músculo cardíaco, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar mecanismos relevantes en modelos de hipertensión, aterosclerosis y miocardiopatía. En sistemas murinos, la perturbación de Myocd ofrece una forma manejable de investigar el control transcripcional de la especificación y la maduración del linaje muscular.

Myocardin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Myocd sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Myocardin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Myocd en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Myocd, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Myocardin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Myocd y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Myocardin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Myocardin en células tumorales con expresión de Myocd silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.