Plasmide CRISPR/Cas9 KO MYH6 (h): sc-400351

Présentation

MYH6 code la chaîne lourde alpha de la myosine cardiaque II, une protéine motrice majeure du sarcomère qui assure la génération de force contractile dépendante de l’actine dans le muscle strié. Grâce au cycle des ponts actine–myosine entraîné par l’activité ATPasique, MYH6 contribue à l’organisation des myofibrilles, à la contractilité sensible au calcium et au développement du muscle cardiaque, en s’intégrant à des voies qui régulent l’assemblage du sarcomère et la mécanotransduction. Des modifications de l’expression de MYH6 ou des variations de sa séquence sont associées à des cardiomyopathies héréditaires et à des phénotypes de cardiopathies congénitales, ce qui reflète son rôle central dans la fonction myocardique. En tant que gène contractile à expression enrichie dans certains tissus, MYH6 est largement utilisé pour étudier la maturation des cardiomyocytes, les réponses au stress et le remodelage structural dans des systèmes modèles cellulaires et génétiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MYH6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYH6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYH6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYH6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MYH6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYH6 pour l'étude de la signalisation de MYH6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYH6 essentiels à la fonction de MYH6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYH6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MYH6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MYH6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYH6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MYH6 plasmide HDR (h) et le MYH6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYH6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYH6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.