Plasmide CRISPR/Cas9 KO MYH10 (h): sc-401835

Présentation

MYH10 code la myosine IIB non musculaire, une protéine motrice dépendante de l’actine qui génère une force contractile et soutient le remodelage du cytosquelette dans les cellules humaines. Elle participe à l’organisation du réseau actomyosine, à la migration cellulaire, à l’adhésion, à la cytocinèse et au maintien de la polarité cellulaire via la régulation des fibres de stress et de la dynamique de l’anneau contractile. La fonction de MYH10 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant la morphogenèse et la mécanotransduction, reliant l’activité motrice aux changements de forme cellulaire et à l’architecture des tissus. Une expression ou une activité altérée de MYH10 a été associée à des défauts du développement et de la division cellulaire, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de dérégulations de la dynamique du cytosquelette dans des modèles de cancer et de maladies neurodéveloppementales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MYH10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MYH10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MYH10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MYH10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MYH10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MYH10 pour l'étude de la signalisation de MYH10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MYH10 essentiels à la fonction de MYH10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MYH10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MYH10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MYH10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MYH10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MYH10 plasmide HDR (h) et le MYH10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MYH10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MYH10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.