Plásmido CRISPR de Activación (h) MYH1: sc-400420-ACT

MYH1 codifica la cadena pesada de miosina 1, una proteína motora del músculo esquelético de contracción rápida que impulsa la contracción basada en actina mediante el ciclo de puentes cruzados dependiente de ATP dentro del sarcómero. Como componente central del filamento grueso, MYH1 contribuye a la especificación del tipo de fibra muscular, la generación de fuerza y la cinética contráctil, integrándose con vías que regulan la miofibrilogénesis, el manejo del calcio y la adaptación metabólica a la actividad. La variación en los patrones de expresión de cadenas pesadas de miosina se utiliza comúnmente para estudiar la diferenciación del músculo esquelético, la remodelación y las respuestas a la denervación o a señales que imitan el ejercicio. Los programas génicos sarcoméricos desregulados, incluidos los cambios en la arquitectura contráctil asociada a MYH1, son relevantes para investigaciones sobre miopatías y mecanismos más amplios de disfunción neuromuscular.

MYH1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYH1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYH1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYH1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYH1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYH1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYH1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYH1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYH1 en células tumorales con expresión de MYH1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.