Myf-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421777

Übersicht

Myf6 (Myf-6; auch als MRF4 bekannt) kodiert einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor innerhalb des Netzwerks myogener Regulationsfaktoren, das die Festlegung der Skelettmuskellinie und die terminale Differenzierung steuert. Myf-6 beteiligt sich an der Reifung von Myoblasten, der Aufrechterhaltung von Myotuben und der Genexpression in Muskelfasern durch kooperative und teilweise redundante Wechselwirkungen mit MYOD1, MYF5 und MYOG und beeinflusst dabei Transkriptionsprogramme, die mit der Sarkomerassemblierung und metabolischer Umprogrammierung verknüpft sind. In der Maus wird Myf6 breit eingesetzt, um die Entwicklungs- und Erwachsenenmyogenese, neuromuskuläre Anpassung und die Regulation von Fasertypen sowie Mechanismen von Muskelschwäche und -degeneration in genetischen und verletzungsbasierten Modellen zu untersuchen. Eine Störung der von Myf6 regulierten Transkription bietet einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um myogene genregulatorische Schaltkreise und die chromatinabhängige Kontrolle der Muskelidentität zu analysieren.

Das Myf-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Myf6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Myf6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Myf6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Myf-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Myf6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Myf-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Myf6-Exone abzielen, die für die Myf-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Myf6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Myf-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Myf-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Myf6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Myf-6 HDR-Plasmid (m) und Myf-6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Myf6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Myf6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.