Plasmide CRISPR/Cas9 KO Myf-6 (m): sc-421777

Présentation

Myf6 (Myf-6 ; également connu sous le nom de MRF4) code un facteur de transcription à domaine basique hélice-boucle-hélice (bHLH) au sein du réseau des facteurs régulateurs myogéniques, qui orchestre la spécification de la lignée du muscle squelettique et la différenciation terminale. Myf-6 participe à la maturation des myoblastes, au maintien des myotubes et à l’expression des gènes des fibres musculaires grâce à des interactions coopératives et en partie redondantes avec MYOD1, MYF5 et MYOG, en influençant des programmes transcriptionnels liés à l’assemblage du sarcomère et au remodelage métabolique. Chez la souris, Myf6 est largement utilisé pour étudier la myogenèse au cours du développement et à l’âge adulte, l’adaptation neuromusculaire et la régulation des types de fibres, ainsi que les mécanismes de faiblesse et de dégénérescence musculaires dans des modèles génétiques et des modèles de lésion. La perturbation de la transcription régulée par Myf6 constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer les circuits de régulation génique myogénique et le contrôle de l’identité musculaire dépendant de la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Myf-6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Myf6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Myf6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Myf6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Myf-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Myf6 pour l'étude de la signalisation de Myf-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Myf6 essentiels à la fonction de Myf-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Myf6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Myf-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Myf-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Myf6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Myf-6 plasmide HDR (m) et le Myf-6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Myf6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Myf6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.