Myf-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401899-ACT

MYF6 codifica a Myf-6 (também conhecida como MRF4), um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básico que atua na rede de fatores reguladores miogênicos responsável por controlar o comprometimento da linhagem de músculo esquelético e a diferenciação terminal. A Myf-6 coordena programas transcricionais ligados à montagem das miofibrilas, à maturação das fibras musculares e à manutenção da identidade muscular por meio de interações com elementos regulatórios E-box e de comunicação cooperativa com outros fatores miogênicos. Sua atividade integra-se a vias que governam a miogênese e o remodelamento muscular, incluindo circuitos transcricionais a jusante de sinais do desenvolvimento e a regulação epigenética da expressão de genes específicos do músculo. A desregulação do controle transcricional miogênico envolvendo MYF6 é relevante para estudos do desenvolvimento neuromuscular, da dinâmica de degeneração/regeneração muscular e de contextos tumorais que apresentam programas aberrantes de diferenciação miogênica, como o rabdomiossarcoma.

Myf-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYF6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Myf-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYF6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Myf-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYF6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Myf-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Myf-6 em células tumorais com expressão de MYF6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.