Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Myf-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400449
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Myf-5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Myf-5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Myf-5 Anticuerpo (B-2): sc-518039
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Myf-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400449 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MYF5 codifica el factor regulador miogénico humano Myf-5, un factor de transcripción básico hélice-bucle-hélice que actúa tempranamente en la determinación del linaje del músculo esquelético y en el compromiso de los mioblastos. Myf-5 regula programas de expresión génica que impulsan la diferenciación miogénica mediante la heterodimerización con proteínas E y la unión a motivos E-box en elementos reguladores específicos del músculo. Actúa dentro de redes del desarrollo que coordinan la miogénesis, incluida la regulación cruzada con otros miembros de la familia MRF como MYOD1 y MYOG, influyendo en las decisiones de destino celular y en el momento de la diferenciación. La desregulación del control transcripcional asociado a MYF5 es relevante para estudios de miopatías congénitas, defectos de regeneración muscular y contextos tumorales con expresión aberrante de factores miogénicos o bloqueo de la diferenciación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Myf-5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MYF5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MYF5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MYF5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Myf-5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MYF5 para la investigación de la señalización de Myf-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MYF5 críticos para la función de Myf-5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MYF5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Myf-5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Myf-5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MYF5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Myf-5 (h) y el plásmido HDR Myf-5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MYF5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MYF5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.