Plasmide Double Nickase (h) MUTYH: sc-404076-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MUTYH correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MUTYH Double Nickase (h) et le plasmide MUTYH Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MUTYH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MUTYH Antibody (C-6): sc-374571
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MUTYH | sc-404076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MUTYH | sc-404076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUTYH code une ADN glycosylase qui initie la réparation par excision de base en reconnaissant et en excisant les adénines mal appariées avec la 8-oxo-7,8-dihydroguanine, limitant ainsi les transversions G:C→T:A causées par les dommages oxydatifs de l’ADN. Cette activité contribue au maintien du génome lors de la réplication et interagit avec les facteurs de la BER en aval ainsi qu’avec des processus de réparation associés à la réplication afin de préserver l’intégrité chromosomique. Une perturbation ou une diminution de la fonction de MUTYH est associée à une augmentation de la charge mutationnelle et de l’instabilité génomique, avec une forte pertinence pour la prédisposition aux tumeurs colorectales et des phénotypes apparentés de défaut de réparation de l’ADN. En conséquence, MUTYH est fréquemment étudié dans le cadre des réponses au stress oxydatif, des voies d’évitement des mutations et des mécanismes qui façonnent les signatures de mutations somatiques.
MUTYH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MUTYH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MUTYH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MUTYH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MUTYH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.