Plásmido Doble Nickase (h) MUS81: sc-402664-NIC

MUS81 codifica una endonucleasa específica de estructura que forma un heterodímero con EME1/EME2 para resolver horquillas de replicación detenidas e intermediarios de recombinación, como estructuras similares a las uniones de Holliday. Funciona dentro de las vías de respuesta al daño del ADN y al estrés replicativo, coordinándose con la recombinación homóloga y la señalización de puntos de control para preservar la estabilidad del genoma. La actividad de MUS81 contribuye a la fidelidad de la segregación cromosómica y limita la acumulación de intermediarios de ADN tóxicos durante la fase S. La desregulación del procesamiento dependiente de MUS81 se ha relacionado con un aumento de la inestabilidad genómica y una sensibilidad alterada al estrés replicativo en contextos asociados al cáncer, lo que lo convierte en un objetivo común en estudios mecanísticos de reparación del ADN.

MUS81 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MUS81 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MUS81. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MUS81. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MUS81 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.