Plásmido CRISPR de Activación (h) MUS81: sc-402664-ACT

El MUS81 humano codifica una endonucleasa específica de estructura que se asocia con EME1/EME2 para resolver horquillas de replicación detenidas e intermediarios de recombinación, incluidas las uniones de Holliday con muesca, los bucles D (D-loops) y las solapas 3′. MUS81 funciona en redes de respuesta al daño del ADN y mantiene la estabilidad del genoma mediante una acción coordinada con la recombinación homóloga, la reparación asociada a la anemia de Fanconi y las vías de tolerancia al estrés replicativo. Al controlar el procesamiento de estructuras de ADN aberrantes, MUS81 influye en la señalización de los puntos de control y en la fidelidad de la segregación cromosómica durante la fase S y la mitosis. La desregulación de la actividad de MUS81 o del equilibrio entre vías se ha asociado con alteraciones en el manejo del estrés replicativo y con fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y para defectos hereditarios de reparación del ADN.

MUS81 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MUS81 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MUS81 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MUS81 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MUS81, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MUS81. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MUS81 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MUS81 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MUS81 en células tumorales con expresión de MUS81 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.