Plasmide CRISPR/Cas9 KO Munc13-2 (m): sc-423611

Présentation

Unc13b code pour Munc13-2, un facteur présynaptique de la zone active impliqué dans l’amorçage, indispensable à la maturation des vésicules synaptiques vers un état immédiatement libérable et à une libération efficace de neurotransmetteurs déclenchée par le Ca²⁺. Munc13-2 coopère avec des régulateurs des SNARE ainsi qu’avec le réseau RIM/Rab3 pour coordonner l’arrimage, l’amorçage et la plasticité à court terme, modulant ainsi la force synaptique et l’activité des circuits. Via ses domaines C1 et C2, Munc13-2 intègre des signaux dépendants du diacylglycérol et du Ca²⁺ afin d’ajuster la probabilité de libération et la dynamique des pools vésiculaires. La dérégulation de l’amorçage vésiculaire et de la transmission synaptique est largement pertinente pour des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui motive des études mécanistiques d’Unc13b dans la signalisation neuronale et le dysfonctionnement des réseaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Munc13-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Unc13b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Unc13b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Unc13b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Munc13-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Unc13b pour l'étude de la signalisation de Munc13-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Unc13b essentiels à la fonction de Munc13-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Unc13b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Munc13-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Munc13-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Unc13b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Munc13-2 plasmide HDR (m) et le Munc13-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Unc13b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Unc13b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.