Plásmido Doble Nickase (h) Mucin 2/MUC2: sc-400221-NIC

MUC2 codifica la mucina 2, una mucina secretada formadora de gel que constituye un componente estructural principal de la barrera mucosa intestinal y un determinante clave de la hidratación y lubricación de la superficie epitelial. Mediante una extensa O-glicosilación y polimerización, MUC2 contribuye a la defensa mucosa, regula la separación espacial entre el huésped y la microbiota, y favorece la homeostasis epitelial en el tracto gastrointestinal. Su expresión y procesamiento se entrecruzan con los programas de diferenciación de las células caliciformes, la función de la vía secretora del RE/Golgi y el ensamblaje de la red de mucinas. La desregulación de la abundancia de MUC2 o de las propiedades de la barrera de mucinas se investiga con frecuencia en la enfermedad inflamatoria intestinal, la inflamación asociada a colitis y contextos de estrés epitelial relevantes para la biología tumoral colorrectal.

Mucin 2/MUC2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MUC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MUC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MUC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MUC2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.