Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mucin 2/MUC2: sc-400221-ACT

MUC2 code la mucine 2, une mucine sécrétée majeure formant un gel, qui constitue l’ossature structurelle de la couche de mucus intestinal et contribue à l’intégrité de la barrière épithéliale. Grâce à une O‑glycosylation extensive et à sa polymérisation, MUC2 régule l’hydratation de la muqueuse, l’organisation spatiale des microbes et la protection contre les agressions de la lumière intestinale, ce qui la relie à la signalisation de l’immunité innée et aux programmes de différenciation épithéliale. Une expression altérée de MUC2 ou une architecture anormale des mucines est associée à un dysfonctionnement de la barrière de mucus, à une dysbiose et à des processus inflammatoires chroniques dans le tractus gastro‑intestinal. MUC2 est également largement utilisée comme marqueur de la lignée des cellules caliciformes et des états épithéliaux sécrétoires dans les études de l’homéostasie intestinale et du remodelage lié aux maladies.

Mucin 2/MUC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MUC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mucin 2/MUC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MUC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MUC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mucin 2/MUC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MUC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mucin 2/MUC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mucin 2/MUC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MUC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.