MTFmt Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407106

Descripción general

MTFMT codifica la metionil‑ARNt formiltransferasa mitocondrial (MTFmt), una enzima que formila el Met‑ARNtMet iniciador para generar fMet‑ARNt, un sustrato clave para el inicio de la traducción mitocondrial. Esta actividad favorece la síntesis eficiente de componentes de la fosforilación oxidativa (OXPHOS) codificados por el ADN mitocondrial y ayuda a mantener la integridad de la cadena respiratoria y la producción de ATP. La alteración de MTFmt perturba la proteostasis mitocondrial y puede desencadenar respuestas de estrés bioenergético, vinculando este gen con vías que regulan la expresión génica mitocondrial, el transporte de electrones y la homeostasis metabólica. Las variantes patogénicas o la función reducida se asocian con defectos de traducción mitocondrial y fenotipos compatibles con una deficiencia combinada de OXPHOS, lo que convierte a MTFMT en una diana relevante en estudios sobre mecanismos de enfermedad mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MTFmt (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MTFMT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MTFMT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MTFMT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MTFmt.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MTFMT para la investigación de la señalización de MTFmt, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MTFMT críticos para la función de MTFmt
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MTFMT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MTFmt CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MTFmt CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MTFMT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MTFmt (h) y el plásmido HDR MTFmt (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MTFMT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MTFMT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.