Particules Lentivirales d'Activation (h) MTDH: sc-413927-LAC

Le gène humain **MTDH** (metadherin/AEG-1) code une protéine d’échafaudage multifonctionnelle qui coordonne des programmes transcriptionnels et post-transcriptionnels liés à la survie cellulaire, à l’inflammation et à l’adaptation au stress. MTDH a été impliqué dans la modulation des voies de signalisation **NF-κB** et **PI3K/AKT**, la régulation de la transition épithélio-mésenchymateuse, ainsi que le contrôle du métabolisme de l’ARN via des interactions avec des complexes ribonucléoprotéiques. Une expression altérée de MTDH est associée à des phénotypes tumoraux agressifs, notamment une invasion accrue, des métastases et une résistance aux traitements, et elle est également étudiée dans le contexte de la neuroinflammation et des dérégulations métaboliques. Ces propriétés font de MTDH un nœud pertinent pour disséquer les réseaux de signalisation oncogéniques, les circuits de régulation génique et les voies de réponse au microenvironnement dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales MTDH (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MTDH dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MTDH (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MTDH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MTDH. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MTDH ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.