Plásmido Doble Nickase (m) MTAP: sc-426257-NIC

El gen Mtap de ratón codifica la metiltioadenosina fosforilasa (MTAP), una enzima clave de la vía de rescate de metionina que convierte la 5′-metiltioadenosina en adenina y 5-metiltiorribosa-1-fosfato, vinculando así el metabolismo de las poliaminas con la homeostasis de las purinas y de los donadores de grupos metilo. La actividad de MTAP sostiene el equilibrio de nucleótidos, la capacidad de metilación y la adaptabilidad metabólica relacionada con el estado redox, integrándose con el metabolismo de un carbono y con procesos dependientes de la S-adenosilmetionina. La alteración de la expresión de MTAP o su pérdida puede remodelar los estados metabólicos celulares e influir en programas asociados a la proliferación mediante cambios en los reservorios de adenina y en la señalización sensible a la metilación. En investigación biomédica, Mtap se estudia comúnmente por su impacto en vulnerabilidades metabólicas, regulación epigenética y respuestas al estrés en células y tejidos de mamíferos.

MTAP El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mtap en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mtap. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mtap. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mtap alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.