Plasmide CRISPR d'Activation (h) MTA1: sc-400942-ACT

La MTA1 humaine (metastasis associated 1) est un facteur de régulation de la chromatine surtout connu comme composant central du complexe NuRD (nucleosome remodeling and deacetylase), reliant le remodelage de la chromatine dépendant de l’ATP à la désacétylation des histones afin de moduler les programmes transcriptionnels. Par ses interactions avec HDAC1/2, CHD3/4 et d’autres sous-unités de NuRD, MTA1 influence le contrôle épigénétique de l’expression génique, les réponses aux dommages de l’ADN et les transitions d’état cellulaire telles que la plasticité épithélio-mésenchymateuse. MTA1 a été étudiée dans des voies qui régissent la prolifération, la migration et la signalisation du stress, et une expression altérée est fréquemment associée à des phénotypes tumoraux agressifs et à un comportement métastatique dans de nombreux types de cancers. Son rôle dans la reconfiguration de l’accessibilité des enhancers et des promoteurs en fait une cible utile pour disséquer les réseaux transcriptionnels qui couplent l’état de la chromatine à la signalisation oncogénique et inflammatoire.

MTA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MTA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MTA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MTA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MTA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MTA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MTA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MTA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MTA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MTA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.