Plásmido Doble Nickase (h) mSHMT: sc-402609-NIC

SHMT2 codifica la serina hidroximetiltransferasa mitocondrial (mSHMT), una enzima dependiente de PLP que cataliza la conversión reversible de serina a glicina, a la vez que genera 5,10‑metilentetrahidrofolato en el ciclo mitocondrial de un carbono. Esta actividad sostiene el metabolismo de un carbono mediado por folatos, acoplando la interconversión de aminoácidos con la biosíntesis de nucleótidos, la homeostasis redox y la función mitocondrial. A través de su papel en mantener el suministro de formiato al reservorio citosólico de folatos, SHMT2 influye en la capacidad de replicación y reparación del ADN, así como en las respuestas celulares al estrés metabólico y oxidativo. La desregulación de las vías vinculadas a SHMT2 se ha asociado con fenotipos proliferativos y metabólicos, y se estudia en contextos que incluyen el metabolismo tumoral y la disfunción mitocondrial.

mSHMT El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SHMT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SHMT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SHMT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SHMT2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.