Plásmido Doble Nickase (h) MRP2: sc-400601-NIC

ABCC2 codifica el transportador humano de la familia ATP-binding cassette MRP2 (ABCC2), una bomba de eflujo apical que exporta conjugados de glutatión, glucurónido y sulfato, así como una amplia gama de xenobióticos, a través de epitelios polarizados. MRP2 favorece la desintoxicación y la formación de bilis al acoplar la hidrólisis de ATP al transporte canalicular en los hepatocitos, y contribuye a la función de barrera en el intestino y el riñón. Mediante la regulación de la exposición intracelular a metabolitos y fármacos, la actividad de ABCC2 influye en la farmacocinética y en las respuestas celulares al estrés, e interactúa con vías que controlan el estrés oxidativo, el metabolismo de conjugación y la señalización inflamatoria. La alteración genética o funcional de ABCC2 se asocia con fenotipos de hiperbilirrubinemia conjugada como el síndrome de Dubin–Johnson y se estudia ampliamente por su papel en la disposición de fármacos y en mecanismos de resistencia a múltiples fármacos.

MRP2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ABCC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ABCC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ABCC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ABCC2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.