Plásmido CRISPR de Activación (h) MOF: sc-401891-ACT

KAT8 codifica MOF (MYST1), una acetiltransferasa de histonas de la familia MYST que cataliza la acetilación de la lisina 16 de la histona H4 (H4K16ac), una marca clave de la cromatina asociada con cromatina abierta y competencia transcripcional. MOF actúa dentro de complejos multiproteicos para regular la actividad de promotores y potenciadores (enhancers), coordinar la elongación transcripcional y modular la arquitectura de la cromatina durante la replicación y la reparación del ADN. A través de estas funciones epigenéticas, MOF influye en la estabilidad del genoma, la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés; los cambios en la actividad de KAT8/MOF y en los patrones de H4K16ac se estudian con frecuencia en contextos de programas transcripcionales oncogénicos y de señalización desregulada del daño al ADN. Su posición central en la regulación de la cromatina también convierte a KAT8 en un nodo útil para investigar la comunicación cruzada entre la remodelación de la cromatina dependiente de acetilación y las vías de señalización que controlan la proliferación y la diferenciación.

MOF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KAT8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MOF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KAT8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KAT8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MOF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KAT8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MOF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MOF en células tumorales con expresión de KAT8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.