MMP2 Double Nickase Plasmid (m): sc-421674-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MMP2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MMP2 Double-Nickase-Plasmid (m) und MMP2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mmp2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MMP2: sc-13594
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MMP2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421674-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MMP2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421674-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Mmp2** kodiert die Matrix-Metalloproteinase-2 (MMP2), eine sekretierte, zinkabhängige Endopeptidase, die Basalmembran- und interstitielle extrazelluläre Matrixkomponenten wie Kollagen Typ IV und Gelatine abbaut. Die MMP2-Aktivität wird durch Sekretion als Zymogen und Aktivierung an der Zelloberfläche in Koordination mit MT1-MMP (MMP14) und TIMP2 reguliert, wodurch sie mit perizellulärer Proteolyse, Zellmigration und Gewebeumbau verknüpft ist. Über den Umsatz der extrazellulären Matrix steht MMP2 im Zusammenhang mit Integrin-Signalkaskaden, epithelial-mesenchymalen Transitionsprogrammen und entzündlichen Remodeling-Signalwegen. Eine fehlregulierte MMP2 wurde mit fibrotischem Umbau, vaskulären und kardialen Veränderungen der Matrix sowie invasiven Phänotypen in onkologischen Modellen in Verbindung gebracht und ist daher ein häufiges Ziel mechanistischer Studien in Maus-Systemen.
MMP2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mmp2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mmp2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mmp2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mmp2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.