Plasmide CRISPR/Cas9 KO MMP-20 (h): sc-405838

Présentation

MMP20 code la métalloprotéinase matricielle 20 (MMP‑20, enamélysine), une endopeptidase dépendante du zinc spécialisée dans le remodelage de la matrice extracellulaire, avec une activité marquée lors de la formation de l’émail. En clivant des protéines structurales de la matrice et en transformant des composants de la MEC, MMP‑20 contribue à une protéolyse régulée qui coordonne la maturation tissulaire et les processus de minéralisation. Son activité s’inscrit dans des voies plus larges régulées par les métalloprotéinases, qui modèlent les interactions cellule–matrice, les cascades d’activation des protéases et la dynamique de la signalisation extracellulaire. Une dysrégulation de la fonction de MMP20 est associée à des anomalies du développement de l’émail et a été étudiée dans le contexte de modifications, induites par la protéolyse, des microenvironnements tissulaires pertinentes pour la biologie des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MMP-20 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MMP20 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MMP20, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MMP20 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MMP-20.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MMP20 pour l'étude de la signalisation de MMP-20, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MMP20 essentiels à la fonction de MMP-20
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MMP20 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MMP-20 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MMP-20 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MMP20. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MMP-20 plasmide HDR (h) et le MMP-20 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MMP20 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MMP20 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.