MMD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426581

Descripción general

Mmd codifica MMD, una proteína de membrana multipaso enriquecida en el Golgi y en el sistema endomembranoso, que se ha vinculado con la maduración del linaje mieloide y la biología de las células inmunitarias innatas. Diversos estudios implican a MMD en la regulación del tráfico de membranas y de las salidas de señalización que moldean las respuestas inflamatorias, con conexiones con las vías MAPK/ERK y con rutas asociadas a citocinas en macrófagos y tipos celulares afines. Se han descrito alteraciones en la expresión de MMD en distintos contextos inmunitarios y tumorales, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para investigar cómo los programas mieloides se interconectan con el estrés celular y con señales del microambiente. En modelos murinos, la perturbación de MMD permite diseccionar la señalización específica de linaje y los fenotipos de inflamación a nivel de órgano, sin realizar inferencias terapéuticas ni clínicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MMD (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mmd en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mmd junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mmd tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MMD.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mmd para la investigación de la señalización de MMD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mmd críticos para la función de MMD
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mmd para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MMD CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MMD CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mmd. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MMD (m) y el plásmido HDR MMD (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mmd para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mmd definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.