Plasmide Double Nickase (m) mitoNEET: sc-424640-NIC

Le gène murin **Cisd1** code **mitoNEET**, une protéine liant des clusters **[2Fe–2S]** ancrée à la membrane externe des mitochondries, qui participe au transfert des clusters fer–soufre, à la régulation rédox et à la coordination de la bioénergétique mitochondriale avec l’état métabolique cellulaire. mitoNEET influence la morphologie mitochondriale et la capacité oxydative, en s’interfaçant avec des voies qui gouvernent la gestion des espèces réactives de l’oxygène, l’utilisation des lipides et l’homéostasie du fer. La dérégulation des processus associés à **CISD1/mitoNEET** a été reliée dans la littérature à des dysfonctionnements métaboliques, à des réponses au stress mitochondrial et à des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation mitochondriale. Dans des modèles murins, la perturbation de **Cisd1** peut être exploitée pour étudier comment le contrôle rédox de la membrane externe mitochondriale façonne la physiologie cellulaire dans des tissus à forte demande métabolique.

mitoNEET Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cisd1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cisd1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cisd1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cisd1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.