Plásmido Doble Nickase (h) MITF: sc-400401-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MITF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MITF (h) y el plásmido de doble nickasa MITF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MITF. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MITF Anticuerpo (D-9): sc-515925
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MITF | sc-400401-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MITF | sc-400401-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El factor de transcripción asociado a microftalmia (MITF) es un regulador básico hélice–bucle–hélice con cremallera de leucina que controla la especificación de linaje y la homeostasis en los melanocitos y en otras células derivadas de la cresta neural. Se une a motivos E-box para coordinar programas transcripcionales que gobiernan la melanogénesis, la pigmentación, la biogénesis de orgánulos relacionados con los lisosomas, la proliferación, la diferenciación y la supervivencia, integrando señales de vías como MAPK/ERK, WNT/β-catenina y cAMP/PKA. MITF también contribuye a las respuestas al estrés celular y a la adaptación metabólica mediante la regulación de la autofagia y de redes génicas endolisosomales. La actividad o expresión desregulada de MITF se asocia con trastornos de la pigmentación y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología del melanoma, incluidos el cambio de estado celular tumoral, la invasión y programas transcripcionales asociados a la resistencia.
MITF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MITF en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MITF. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MITF. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MITF alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.