Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MITF (m2): sc-421654-KO-2
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MITF Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MITF, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MITF Antibody (D-9): sc-515925
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MITF (m2) | sc-421654-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Mitf code le facteur de transcription associé à la microphtalmie (MITF), un régulateur de type hélice-boucle-hélice basique à fermeture éclair leucine, qui coordonne les programmes de spécification de lignée et de différenciation dans les mélanocytes et d’autres types cellulaires apparentés dérivés de la crête neurale. MITF contrôle des réseaux transcriptionnels régissant la pigmentation, la biogenèse des mélanosomes, la progression du cycle cellulaire et la survie, en intégrant des signaux tels que les voies MAPK/ERK et cAMP/CREB. Dans des modèles murins, une activité Mitf altérée affecte le développement des mélanocytes, les phénotypes pigmentaires et des fonctions immunitaires liées aux mastocytes, reliant ce gène à des études mécanistiques de la mélanogenèse et de la plasticité des lignages. La dérégulation des programmes dépendants de MITF est largement utilisée pour explorer des voies pertinentes pour la biologie du mélanome, notamment les changements d’état de différenciation et les réponses au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MITF (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mitf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mitf, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mitf à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MITF.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mitf pour l'étude de la signalisation de MITF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Mitf essentiels à la fonction de MITF
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mitf pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MITF plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MITF plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mitf. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MITF plasmide HDR (m) et le MITF (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mitf pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mitf définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.