MiRP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418462

Übersicht

KCNE2 kodiert das humane MinK-related peptide 1 (MiRP1), eine β‑Untereinheit mit einer einzelnen Transmembranpassage, die die Funktion spannungsabhängiger Kaliumkanäle – einschließlich KCNH2/hERG – moduliert, indem sie Gating, Trafficking und die Repolarisation der Membran fein abstimmt. Über seine Effekte auf die Dauer des kardialen Aktionspotenzials und den epithelialen Ionentransport trägt MiRP1 zur elektrischen Erregbarkeit und zur Elektrolythomöostase in Geweben wie dem Herzen und dem gastrointestinalen Epithel bei. Störungen der KCNE2‑abhängigen Kanalregulation werden mit einer veränderten Repolarisationsreserve und einer erhöhten Arrhythmieneigung in Verbindung gebracht und wurden zudem im Kontext der Schilddrüsen‑ und Magenphysiologie untersucht. Als modulierende Untereinheit bietet MiRP1 einen mechanistischen Zugang zur Analyse makromolekularer Ionenkanalkomplexe, der Qualitätskontrolle von Membranproteinen und stimulusabhängiger Veränderungen der Erregbarkeit.

Das MiRP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KCNE2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KCNE2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KCNE2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MiRP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KCNE2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MiRP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KCNE2-Exone abzielen, die für die MiRP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KCNE2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MiRP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MiRP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KCNE2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MiRP1 HDR-Plasmid (h) und MiRP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KCNE2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KCNE2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.